Люминесцентный анализ для оценки нейротоксичности тестируемых соединений на нейроны

Нейритовые выросты, где нейроны развивают проекции, имеют решающее значение для нейронной функции и регенерации.

Для оценки нейротоксических эффектов нейритных тестовых соединений, способствующих росту нейритов, in vitro получают суспензию нервной клетки-предшественника человека, hNPC, в дифференцировочных средах.

Засейте клетки в лунки с многолуночными планшетами, покрытыми поли-L-лизином и ламинином, облегчающими прикрепление клеток к дну лунки и поддерживающими рост клеток. Составляющие среды дифференцировки способствуют дифференцировке hNPC в нейроны.

Обработайте один комплект лунок тестовым составом, способствующим росту нейритов. Он взаимодействует с нейронами, полученными из hNPC, и может индуцировать рост нейритов, не нарушая клеточных метаболических процессов и последующей концентрации аденозинтрифосфата, АТФ — основного клеточного источника энергии.

Добавьте одноступенчатый реагент, содержащий детергенты, фермент люциферазу и субстрат люциферазы, люциферин и ингибиторы АТФазы вместе с ионами магния, и перемешайте.

Детергенты разрушают клеточную мембрану, что приводит к лизису клеток и внутриклеточному выбросу АТФ в раствор. Ингибиторы АТФазы ингибируют высвобождаемую эндо