Энциклопедия экспериментов JoVE
Биологические методы
0 просмотров • 3:52 мин. • July 8th, 2025
Развивающиеся нейроны расширяют цитоплазматические процессы из своих клеточных тел путем вырастания нейритов для развития дендритов и аксонов, которые необходимы для коммуникации между нейронами.
Для изучения влияния целевого белка на рост нейритов берут многолуночный планшет с покровным стеклом, покрытым поли-D-лизином, в основании. Поверхность покровного стекла имеет адгезную культуру первичных корковых нейронов, полученных из эмбрионального мозга крысы.
Обработайте нейроны смесью, содержащей два типа плазмид — плазмиду EGFP, кодирующую усиленный зеленый флуоресцентный белок, и вторую плазмиду, кодирующую целевой белок в подходящем реагенте для трансфекции.
Реагент для трансфекции облегчает проникновение плазмид в клетки.
После трансфекции обе плазмиды экспрессируются, производя зеленые флуоресцентные белки и белки-мишени. Экспрессия EGFP придает зеленую флуоресценцию котрансфицированным клеткам.
Белки-мишени с нейритно-стимулирующим потенциалом инициируют клеточную сигнализацию, что способствует реорганизации цитоскелета и приводит к развитию нейрональных проекций и их удлинению.
Отсадите отработанную среду, и зафиксируйте клетки с помощью параформальдегида. Контрокрашивайте кле
Просмотрите полный транскрипт и получите доступ к тысячам научных видео