Энциклопедия экспериментов JoVE
Биологические методы
0 просмотров • 4:02 мин. • July 8th, 2025
Белок-белковые взаимодействия имеют решающее значение для жизненно важных клеточных функций.
Изучение взаимодействий между трансмембранными белками — мембранными белками, охватывающими липидный бислой клеточной мембраны, начинают с лунок многолуночной пластины, содержащей адгезную культуру клеток млекопитающих.
Далее добавьте раствор, содержащий подходящий трансфекционный агент и пару экспрессирующих плазмид.
Одна из экспрессирующих плазмид кодирует представляющий интерес трансмембранный белок, слитый с маленьким нефункциональным фрагментом фермента люциферазы; другая плазмида кодирует второй представляющий интерес трансмембранный белок, слитый с большим нефункциональным фрагментом фермента люциферазы.
Инкубируйте тарелку. Трансфективный агент способствует клеточному поглощению экспрессии плазмид.
Успешно трансфицированные клетки экспрессируют трансмембранные белки. Взаимодействие между экспрессированными трансмембранными белками приводит к тому, что малые и крупные фрагменты, обращенные к цитоплазме, находятся в непосредственной близости, заставляя их связываться и образовывать активный фермент люциферазу.
Замените фильтрующий материал в лунках на фильтрующий материал, не содержащ
Просмотрите полный транскрипт и получите доступ к тысячам научных видео