Энциклопедия экспериментов JoVE
Биологические методы
0 просмотров • 4:34 мин. • July 8th, 2025
Цифровая капельная ПЦР выявляет индель-мутации — случайную вставку или делецию нуклеотидов в ДНК. Это достигается за счет разделения образца на мельчайшие капли и независимой амплификации ДНК в каждой капле.
Для проведения ddPCR необходимо взять образец ДНК, содержащий дикий тип и мутантные вариации гена-мишени. Загрузите смесь образцов и масло в отдельные отсеки камеры каплегенератора, содержащей микрофлюидный канал.
Образец и масло быстро протекают по узким каналам, эмульгируются в месте соединения и разделяются на несколько капель, каждая из которых содержит несколько молекул ДНК.
Теперь возьмем ПЦР-планшет с буфером, содержащим прямые и обратные праймеры, дНТФ, термостабильную ДНК-полимеразу и два зонда, помеченных разными флуорофорами и молекулами-гасителями. Каждый зонд специфичен для определенного типа аллеля — дикого типа или мутантного.
Перенесите капли на планшет для ПЦР. Поместите пластину в термоамплификатор и запустите реакцию. Во время денатурации нити ДНК отделяются. При температуре отжига праймеры и зонды отжигают до матричной ДНК.
Зонд с зелеными и оранжевыми флуорофорами связывается с последовательностью ДНК дикого типа и мутантной ДНК соответственно. Позже ДНК-по
Просмотрите полный транскрипт и получите доступ к тысячам научных видео