Энциклопедия экспериментов JoVE
Биологические методы
0 просмотров • 8:45 мин. • July 8th, 2025
Дуплексная цифровая полимеразная цепная реакция — ddPCR — позволяет одновременно количественно обнаруживать два различных генетических маркера.
Для начала возьмем образец, содержащий две разные целевые последовательности. Добавьте смесь, содержащую термостабильный фермент ДНК-полимеразу, dNTP и специфичные для мишени праймеры. Затем добавьте два разных олигонуклеотидных зонда, специфичных для мишеней, меченных флуоресцентными репортерами, и молекулу гасителя для обнаружения усиленных мишеней.
Раствор эмульгируется с маслом для разделения целевых последовательностей на многочисленные нанокапли. Каждая капля, содержащая мишень, действует как отдельный реакционный сосуд.
Запустите процесс термоциклирования для реакции амплификации внутри отдельных нанокапель.
При высокой температуре денатурации двухцепочечные мишени разделяются на одинарные нити.
Уменьшите температуру, чтобы достичь соответствующей температуры отжига, позволив праймерам и олигонуклеотидным зондам прикрепиться к шаблону.
Близость гасителя подавляет флуоресценцию репортера. При температуре удлинения ДНК-полимераза удлиняет праймеры и расщепляет олигонуклеотидный зонд. Несвязанный репортер излучает флуоресценцию.
Пропуст
Просмотрите полный транскрипт и получите доступ к тысячам научных видео