Энциклопедия экспериментов JoVE
Биологические методы
0 просмотров • 5:11 мин. • July 8th, 2025
Полимеразная цепная реакция дикого типа, или WTB-PCR, обнаруживает точечные мутации путем селективной амплификации мутантных аллелей с низкой численностью и ингибирования амплификации аллелей дикого типа с высокой численностью в образцах ДНК.
В WTB-PCR используются заблокированные нуклеиновые кислоты или содержащие LNA одноцепочечные модифицированные олигонуклеотиды, комплементарные цепи ДНК дикого типа образца, которая специфически связывается с комплементарной цепью. Связывание LNA блокирует активность ДНК-полимеразы и ингибирует удлинение матричной ДНК дикого типа.
Для проведения WTB-ПЦР возьмите мастер-смесь, содержащую dNTP, LNA и прямые и обратные праймеры, специфичные для мишеней, в дистиллированной воде, не содержащей нуклеаз.
Добавьте в пробирку термостабильный раствор, содержащий ДНК-полимеразу, и пипетируйте смесь в лунку ПЦР-планшета. Добавьте в лунку образец геномной ДНК, содержащий ДНК дикого типа и мутантную ДНК, и начните ПЦР.
Во время ПЦР высокотемпературная денатурация разделяет двухцепочечные ДНК. Разделенные нити действуют как матрицы для отжига праймеров, в то время как LNA связывается со своей комплементарной цепью ДНК дикого типа и образует гибрид блокатора и
Просмотрите полный транскрипт и получите доступ к тысячам научных видео