Количественная полимеразная цепная реакция для перечисления бактериофагов
Энциклопедия экспериментов JoVE
Биологические методы
0 просмотров • 3:25 мин. • July 8th, 2025
Для перечисления бактериофагов с помощью количественной полимеразной цепной реакции (кПЦР) получают коктейль из реакции кПЦР, содержащий полимеразу Taq DNAZA, праймеры, дезоксинуклеотидтрифосфаты (дНТФ) и молекулы флуоресцентного репортерного красителя в оптимизированном буфере. Переложите в лунки планшета для количественной ПЦР.
Добавьте термически обработанные бактериофаги. Термическая обработка высвобождает ДНК бактериофага из частиц бактериофага. Запечатайте пластину, не допуская испарения смеси. Загрузите планшет в систему qPCR, установив соответствующие условия цикла.
Нагревание до высоких температур денатурирует двухцепочечную ДНК на одноцепочечные. Он также активирует ДНК-полимеразу Taq. Отжиг приводит к связыванию последовательно-специфичных праймеров с комплементарными цепями ДНК бактериофага. Удлинение позволяет активированной Taq-ДНК-полимеразе добавлять dNTP к 3'-концу праймера, удлиняя растущую цепь ДНК в направлении от 5' до 3'.
Молекулы красителя интеркалируются во вновь синтезированную двухцепочечную ДНК, вызывая повышенную интенсивность флуоресценции. Каждый цикл ПЦР удваивает целевое количество ДНК, увеличивая интенсивность флуоресценции.
Определите пороговый цик
Просмотрите полный транскрипт и получите доступ к тысячам научных видео