Энциклопедия экспериментов JoVE
Биологические методы
0 просмотров • 4:09 мин. • July 8th, 2025
Полимеразная цепная реакция плавления с высоким разрешением, HRM-PCR, обнаруживает двухцепочечную ДНК, вариации последовательности дцДНК с высокой точностью.
Начните с мастер-смеси, содержащей неактивную Taq-полимеразу, дезоксирибонуклеотидтрифосфаты — dNTP — и флуоресцентный репортерный краситель. Добавьте прямые и обратные капсюли. Направьте смесь пипеткой в лунки ПЦР-планшета.
Добавьте шаблон dsDNA. Запечатайте пластину, не допуская испарения смеси. Начните ПЦР.
Высокая температура денатурации денатурирует дцДНК до одноцепочечной ДНК, одноцепочечной ДНК, и активирует полимеразу. Затем реакцию охлаждают до температуры отжига, способствуя прямому и обратному связыванию праймера с одноцепочечными ДНК посредством сайт-специфичного комплементарного спаривания оснований.
Активируемая полимераза рекрутируется, удлиняя дуплекс ДНК-праймера путем добавления dNTP.
Флуоресцентный репортерный краситель — специфичный для дцДНК краситель, присутствующий в насыщающих концентрациях — интеркалируется внутри всего дуплекса, ярко флуоресцируя. Дуплекс подвергается многократным циклам ПЦР, в результате чего образуется несколько вариантсодержащих фрагментов.
После ПЦР выполните анализ кривой расплав
Просмотрите полный транскрипт и получите доступ к тысячам научных видео