Мультиплексная капельная полимеразная цепная реакция для обнаружения метилирования ДНК в лейкоцитах

Метилирование остатков цитозина ДНК является характерным признаком лейкоцитов или лейкоцитов.

Мультиплексная капельная полимеразная цепная реакция, или мдПЦР, позволяет одновременно идентифицировать несколько метилированных участков ДНК в лейкоцитах.

Приготовьте смесь, содержащую реакционный буфер, ДНК-полимеразу и воду, не содержащую нуклеаз. Добавьте прямые и обратные праймеры и флуоресцентные гидролизные зонды, специфичные для каждой целевой области. Зонды состоят из флуорофорных репортеров разного цвета, связанных с гасителями, чтобы подавить излучение флуоресценции.

Добавьте бисульфит-преобразованную ДНК, в которой неметилированные цитозины дезаминируются в урацилы, в то время как метилированные цитозины остаются неизменными. Смешивать.

Наполните стеклянный шприц смесью масла-поверхностно-активного вещества, а другой — смесью масла-носителя для ПЦР и подключите их к микрофлюидному генератору капель. Масляно-водная смесь для ПЦР эмульгируется в капли размером менее нанолитра. Поверхностно-активное вещество стабилизирует эмульсию и предотвращает слияние капель.

Соберите капли, и проведите ПЦР. В каждой капле высокая температура денатурации денатурирует двухцепочечную ДНК в одноц