Визуализация FLIM-FRET для характеристики белок-белковых взаимодействий у живых бактерий
Энциклопедия экспериментов JoVE
Биологические методы
0 просмотров • 4:26 мин. • July 8th, 2025
Для изучения специфических белок-белковых взаимодействий у живых бактерий с помощью флуоресцентной микроскопии в течение жизни (FLIM) в сочетании с резонансным переносом энергии Фёрстера (FRET) начинают с рекомбинантной бактериальной суспензии. Бактерии экспрессируют специфические цитоплазматические белки, участвующие в метаболических путях, меченные донорными и акцепторными флуоресцентными белками, подходящими для FRET.
Нанесите бактериальную суспензию на агарозную подушечку, которая обездвиживает бактерии на предметном стекле микроскопа. Наденьте покровное стекло на предметное стекло и запечатайте.
Расположите предметное стекло на предметном столике инвертированного сканирующего микроскопа с двухфотонным возбуждением для микроскопии FLIM-FRET. Используйте флуоресцентную лампу для выбора и сканирования интересующей области на бактериальном монослое.
Взаимодействие между экспрессированными цитоплазматическими белками сближает донорные и акцепторные флуоресцентные белки в соответствующей ориентации. При лазерном освещении подходящей длиной волны донорский флуоресцентный белок возбуждается.
Непосредственная близость флуоресцентных белков запускает FRET, что приводит к безызлучательно
Просмотрите полный транскрипт и получите доступ к тысячам научных видео