Флуоресцентная флуктуационная спектроскопия для изучения взаимодействия белков при контактах с клетками

Межклеточные взаимодействия, опосредованные белками на соседних клеточных поверхностях, могут быть изучены в живых клетках с помощью спектроскопии флуоресцентных флуктуаций.

Сначала берут отдельные клеточные культуры, экспрессирующие рецептор адгезии — трансмембранный белок. Рецептор в клетках двух популяций помечен спектрально разделенными флуоресцентными белками. Эти флуоресцентные метки присутствуют в цитоплазматической области рецептора, предотвращая вмешательство в межклеточное взаимодействие.

Откажитесь от среды и добавьте трипсин, облегчающий отслоение клеток. Смешайте две клеточные популяции и инкубируйте, позволяя рецепторам соседних клеток образовывать гомотипические транс-взаимодействия.

Поместите клетки под конфокальный микроскоп. Осветите образец с помощью лазерных источников соответствующей длины волны, вызывая излучение от обеих флуоресцентных меток. Найдите две соседние клетки с разноцветными флуоресцентными сигналами, находящимися в контакте.

Получите линейное сканирование — перпендикулярно области клеточных мембран, соприкасающихся — с использованием спектрального канала обеих флуоресцентных меток. Лазер фокусируется на небольшом объеме образца — объеме обнаружени