JoVE Encyclopedia of Experiments
Биологические методы
0 просмотров • 4:43 мин • July 8th, 2025
Для начала проведения кондуктимометрического биосенсорного анализа на основе β-лактамаз необходимо установить микросхему преобразователя с рабочими, счетчиком и электродами сравнения. Рабочий электрод имеет проводящее полимерное покрытие, облегчающее иммобилизацию целевого антигена. На контрольных и противоэлектродах отсутствует это полимерное покрытие.
Добавьте на чип раствор, содержащий целевой антиген. Инкубировать. Антиген иммобилизуется на поверхности рабочего электрода в результате нековалентных взаимодействий. Промойте для удаления несвязанных антигенов.
Добавьте решение для блокировки. Белки в растворе прикрепляются к несвязанным участкам на рабочем электроде и блокируют их.
Добавьте в чип бифункциональный химерный белок, чтобы обнаружить иммобилизованный антиген. Химерный белок содержит фермент β-лактамазу — бактериальный белок, отвечающий за устойчивость к антибиотикам. Фермент сливается с нанотелом — N-концевой вариабельной областью однодоменных антител.
При инкубации нанотело белка связывается с иммобилизованным антигеном-мишенью. Промойте, чтобы удалить несвязанные химерные белки.
Подключите микросхему к цифровому мультиметру, управляемому компьютером. Добавьте детектирующий раствор, содержащий антибиотик бензилпенициллин — субстрат для β-лактамазы.
Бензилпенициллин связывается с β-лактамазой антиген-связанного химерного белка и гидролизуется, вызывая высвобождение протонов. Протоны индуцируют изменение электропроводности полимера.
Построить график разницы проводимости между электродом сравнения и рабочим электродом с иммобилизованным антигеном-мишенью в реальном времени, подтверждая его взаимодействие с химерным белком.
Для начала проведения кондуктимометрического биосенсорного анализа на основе β-лактамаз необходимо установить микросхему преобразователя с рабочими, счетчиком и электродами сравнения. Рабочий электрод имеет проводящее полимерное покрытие, облегчающее иммобилизацию целевого антигена. На контрольных и противоэлектродах отсутствует это полимерное покрытие.
Добавьте на чип раствор, содержащий целевой антиген. Инкубировать. Антиген иммобилизуется на поверхности рабочего электрода в результате нековалентных взаимодействий. Промойте для удаления несвязанных антигенов.
Добавьте решение для блокировки. Белки в растворе прикрепляются к несвязанным участкам на рабочем электроде и блокируют их.
Добавьте в чип бифункциональный химерный белок, чтобы обнаружить иммобилизованный антиген. Химерный белок содержит фермент β-лактамазу — бактериальный белок, отвечающий за устойчивость к антибиотикам. Фермент сливается с нанотелом — N-концевой вариабельной областью однодоменных антител.
При инкубации нанотело белка связывается с иммобилизованным антигеном-мишенью. Промойте, чтобы удалить несвязанные химерные белки.
Подключите микросхему к цифровому мультиметру, управляемому компьютером. Добавьте детектирующий раствор, содержащий антибиотик бензилпенициллин — субстрат для β-лактамазы.
Бензилпенициллин связывается с β-лактамазой антиген-связанного химерного белка и гидролизуется, вызывая высвобождение протонов. Протоны индуцируют изменение электропроводности полимера.
Построить график разницы проводимости между электродом сравнения и рабочим электродом с иммобилизованным антигеном-мишенью в реальном времени, подтверждая его взаимодействие с химерным белком.