Биотинилированный пептидный зонд, проникающий в клетку, для обнаружения белок-белковых взаимодействий

В клетках белки связываются с взаимодействующими белками через определенные последовательности в своей структуре, модулируя функционирование внутриклеточных белков.

Чтобы обнаружить внутриклеточные белковые взаимодействия, берут адгезную культуру клеток. Отсасывайте среду.

Добавьте биотинилированный пептид, проникающий в клетки, раствор BCPP и инкубируйте.

Каждый BCPP содержит пептидную последовательность, которая помогает в специфическом связывании с целевым внутриклеточным белком. Пептид имеет проникающий в клетки пептид, CPP, на N-конце пептида и биотин на C-конце для легкого обнаружения.

Во время инкубации положительно заряженная область CPP способствует проникновению связанного пептида через клеточную мембрану, достигая цитоплазмы. Пептид связывается со своим внутриклеточным взаимодействующим белковым партнером, образуя белковый комплекс BCPP-мишень.

Добавьте буфер, содержащий молекулы детергента, которые разрывают клеточную мембрану и высвобождают белковые комплексы-мишени BCPP и другие клеточные компоненты.

Добавьте раствор авидина, связанного с агарозными шариками, — гликопротеина, который специфически связывается с биотином в BCPP. Инкубируйте, обеспечивая необратимое связ