Поверхностный плазмонный резонанс для изучения биомолекулярных взаимодействий с помощью сенсорного чипа

Чтобы выполнить поверхностный плазмонный резонанс (SPR) для изучения биомолекулярных взаимодействий, начните с сенсорного чипа, расположенного над детектором SPR в проточной ячейке. Этот сенсорный чип с металлическим покрытием имеет слой гидрогелевого материала, нанесенный на поверхность чипа, что делает его более подходящим для иммобилизации белка.

Наложите на чип вирусные пептиды, которые взаимодействуют с гидрогелем и обездвиживают на поверхности. Промыть щелочным раствором для гашения, который предотвращает неспецифические взаимодействия белков.

Направьте поляризованный свет на чип. Под резонансным углом электроны металлов поглощают этот свет и резонируют, уменьшая интенсивность отраженного света под соответствующим углом отражения.

Фотоприемник собирает этот отраженный свет, а процессор преобразует этот сигнал в базовый, генерируя сенсорную грамму — график, представляющий реакцию датчика во времени.

Влейте раствор противовирусного средства в проточную ячейку. Во время потока противовирусные агенты взаимодействуют с иммобилизованными вирусными пептидами на чипе. Эта ассоциация изменяет показатель преломления, который изменяет угол и интенсивность отраженного света, что в конечном итоге приводит к срабатыванию датчика.

Добавьте промывочный буфер с высокой ионной силой, который нарушает взаимодействие между двумя молекулами, что приводит к их диссоциации и снижению отклика датчика.

Проанализируйте форму сенсорной диаграммы и оцените ассоциацию и диссоциацию двух молекул, имеющих решающее значение в биомолекулярных взаимодействиях.

Для двухканальной системы SPR используйте HBS-EP+ в качестве буфера для работы, 10 миллимолярных глициновых соляных кислот pH от 1,5 до 1,6 в качестве буфера для регенерации и включите прибор для дегазации, автоподатчик и насос. Затем промойте всю систему водой двойной дистилляции в течение 1 часа.

Затем капните иммерсионное масло на детектор и установите стеклянный чип датчика, покрытый тонкой золотой пленкой, а на верхней стороне функционализированный гидрогелем карбоксиметилдекстрана, непосредственно на детектор под трехпортовой проточной ячейкой. Затем зафиксируйте настройку, потянув ручку вниз.

Чтобы иммобилизовать белковые лиганды к сенсорным чипам, откройте таблицу прогона, нажав на «Форму» в строке меню, и «Редактор таблиц выполнения » в интегрированном программном обеспечении SPRAutoLink. Затем выберите и нажмите на BASIC_Immobilization из списка доступных таблиц запуска и следуйте инструкциям экспериментальной процедуры на экране компьютера.

Затем нажмите на «Редактор наборов образцов » в разделе «Форма», чтобы заполнить список реагентов для двух штативов, размещенных в автосэмплере для дальнейших анализов. Нажмите на Autosampler Sampler Direct Control в качестве инструмента в строке меню, чтобы переместить стойки вперед или обратно домой, и выберите 4 градуса Цельсия в качестве рабочей температуры.

Запустите насос для настаивания воды двойной дистилляции, нажав на «Инструменты» и «Прямое управление насосом », и записывайте данные, нажав на «SPR Instrument Direct Control», и каждый раз запускайте в вновь появившемся окне. После добавления связующих реагентов во флаконы объемом 300 микролитров поместите их в штативы автосамплеров и запустите таблицу прогона, нажав на кнопку «Запустить».

Для простого взаимодействия белков после заправки насоса со скоростью 25 000 микролитров в минуту выполните корректировку базового уровня в течение 30 секунд. Дайте возможность последующей корректировки исходной линии с помощью дважды дистиллированной воды в течение 1,5 минут перед закалкой активированной поверхности чипа 1 моляром гидрохлорида этаноламина, pH 8,5. Затем переключите пробирки с пробоотборника жидкости на дегазатор из дважды дистиллированной воды в бутылку с HBS-EP+.

Нажмите на «Форму», прокрутите вниз и перейдите на «Постобработка», нажав на этот режим работы. Затем нажмите кнопку Добавить, чтобы выбрать кривые привязки, созданные с течением времени в форме графика данных для каждой ячейки потока, и экспортируйте наложение в виде файла скруббера. Затем нажмите «Файл», чтобы открыть параметры сохранения файлов и получить кривые отклика, выровняв левую и правую кривые и вычитая сигналы второго опорного канала из сигналов лигандного канала.