Энциклопедия экспериментов JoVE
Биологические методы
0 просмотров • 6:05 мин. • July 8th, 2025
Спектроскопия ядерного магнитного резонанса, или ЯМР, позволяет обнаруживать белок-белковое взаимодействие на атомном уровне.
Чтобы изучить взаимодействие между глобулярными и спиральными белками, пометьте очищенные белки дикого типа или мутантные глобулярные белки 15N — изотопом азота. В ЯМР-пробирке смешайте меченые глобулярные и немеченые спиральные белки в растворителе, содержащем стандарт ЯМР. Вставьте трубку в ЯМР-спектрометр.
Магниты спектрометра генерируют сильное магнитное поле, выравнивая 15N-меченых ядер глобулярных белков параллельно полю. Радиочастотный, или РЧ, импульс возбуждает 15N-ядер, чтобы они выровнялись антипараллельно полю.
Частота импульсов, необходимая для перехода 15N ядер между двумя состояниями, определяет резонансную частоту. Нормализация резонансной частоты 15N-резонанса до стандарта ЯМР измеряет химический сдвиг 15N.
Магнитное поле настраивается таким образом, чтобы выровнять 1H-ядра, связанные с 15Н, параллельно полю. Радиочастотные импульсы корректируются, и регистрируется химический сдвиг на 1H.
Во время взаимодействия белков химическая среда, окружающая взаимодействующие аминокислотные остатки, изменяется, изменяя 15химических связей N-1H и соотве
Просмотрите полный транскрипт и получите доступ к тысячам научных видео