Энциклопедия экспериментов JoVE
Биологические методы
0 просмотров • 5:22 мин. • July 8th, 2025
Начните фаговый дисплей с добавления библиотеки фагов в лунки многолуночного планшета, покрытого белком-мишенью. Библиотека фагов содержит генетически модифицированные фаги, каждый из которых отображает отдельный вариант белка, слитый с белком оболочки на его поверхности. Инкубируйте, позволяя фагу и белкам-мишеням взаимодействовать.
Фаги с белками с высоким сродством к белку-мишени связываются с белком-мишенью. Промойте буфером, удаляя несвязанные фаги. Добавьте кислый раствор, нарушая взаимодействие фагов и целевых белков, высвобождая фаги в раствор. Нейтрализуйте pH раствора с помощью буфера, поддерживая стабильность фагов.
Перенесите фаги в свежую пробирку. Инкубируйте с блокирующим раствором, содержащим белки, предотвращающие неспецифические взаимодействия.
Перенесите фаги в активно делящуюся суспензию кишечной палочки, заражающую бактерии и инициирующую цикл репликации фагов. Дополните вспомогательными фагами, которые заражают бактерии, обеспечивая белки оболочки, необходимые для упаковки потомства фагов. Перенесите суспензию в селективную среду, позволяя размножаться инфицированным фагами бактериям.
Фаги потомства в конечном итоге высвобождаются в среду. Центрифуга. Соберите
Просмотрите полный транскрипт и получите доступ к тысячам научных видео