Энциклопедия экспериментов JoVE
Биологические методы
0 просмотров • 7:05 мин. • July 8th, 2025
Чтобы идентифицировать сайты связывания целевого белка на ДНК, начните с клеток-предшественников олигодендроцитов, содержащих целевой белок, сшитый со специфическими последовательностями ДНК в хроматине.
Обработайте клетки лизисным буфером, содержащим ингибиторы протеазы. Буфер для лизиса лизирует клетки, в то время как ингибиторы инактивируют протеазы, сохраняя целостность комплексов белок-хроматин.
Ультразвуком обрабатывайте содержимое, чтобы разрезать комплексы на более мелкие фрагменты хроматина, при этом некоторые из них сохраняют целевой белок.
Центрифуга для гранулирования компонентов клетки и перенос надосадочной жидкости, содержащей фрагменты хроматина, в свежую пробирку. Инкубируйте с антителами-мишенями, которые специфически связываются с белком-мишенью на фрагментах хроматина.
Дополните пробирку магнитными шариками, покрытыми белком А, которые связываются с Fc-областью предварительно связанных антител. Применение магнитного поля для селективного осаждения связанных антителами белков-мишеней в комплексе с фрагментами хроматина.
Обрабатывайте грануловые комплексы буфером для элюирования с высоким содержанием соли, чтобы нарушить белок-хроматиновые взаимодействия и высвобо
Просмотрите полный транскрипт и получите доступ к тысячам научных видео