Энциклопедия экспериментов JoVE
Биологические методы
0 просмотров • 5:00 мин. • July 8th, 2025
Фактор транскрипции, TF, представляет собой белок, который связывается со специфическим участком ДНК гена и регулирует транскрипцию.
Чтобы измерить взаимодействия TF-ДНК с помощью флуоресцентной анизотропии, возьмите многолуночный планшет. Добавьте в лунку расплавленный гель, смешанный с буферным раствором, содержащим известные концентрации меченой флуорофором референсной ДНК, содержащей TF-связывающий сайт и более высокую концентрацию молекул TF, и инкубируйте.
По мере того, как меченая референсная ДНК распределяется в геле, более высокая концентрация молекулы TF гарантирует, что все молекулы ДНК связаны с TF. Добавьте буферизованный раствор, содержащий немеченую ДНК конкурента с одноточечной мутацией.
Проанализируйте гель пластины с помощью высокоэффективной флуоресцентной анизотропной микроскопии.
Поляризованный свет возбуждает референсный флуорофор, связанный с ДНК, который переориентируется из-за молекулярного кувыркания и излучает разнонаправленный деполяризованный свет — явление, называемое флуоресцентной анизотропией, FA.
При связывании с TF молекулярная масса референсного связанного с ДНК флуорофора увеличивается, и он падает медленнее, излучая больше поляризованного света
Просмотрите полный транскрипт и получите доступ к тысячам научных видео