Энциклопедия экспериментов JoVE
Биологические методы
0 просмотров • 4:25 мин. • July 8th, 2025
РНК-связывающие белки, RBP, функционируют как посттранскрипционные регуляторы, связываясь с областью инициации трансляции, TIR, мРНК и подавляя трансляцию.
Для изучения взаимодействия РНК-RBP посредством трансляционной репрессии репортерного гена берут культуру бактериальных клеток, содержащую две плазмиды — сайт связывания и RBP-плазмиды.
Плазмида сайта связывания кодирует флуоресцентный репортерный ген. После транскрипции полученная мРНК TIR содержит сайт связывания рибосом и структуру шпильки с последовательностью, распознаваемой RBP.
Рибосомы связываются с сайтом связывания на мРНК и дестабилизируют структуру шпильки, что приводит к трансляции мРНК и образованию флуоресцентного репортерного белка. RBP-плазмида экспрессирует химерный RBP, слитый с другим флуоресцентным белком. Индуцируемый промотор контролирует экспрессию химерного белка.
Добавьте индуктор, который активирует транскрипционный фактор, который связывается с промотором, индуцируя экспрессию химерного белка. RBP химерного белка связывается со структурой шпильки. Это блокирует связывание рибосомы с мРНК, препятствуя трансляции репортерного белка.
С увеличением концентрации индуктора продукция RBP увеличивается, что п
Просмотрите полный транскрипт и получите доступ к тысячам научных видео