Энциклопедия экспериментов JoVE
Биологические методы
0 просмотров • 5:42 мин. • July 8th, 2025
Радиационно-индуцированные двухцепочечные разрывы ДНК, или DSB, инициируют рекрутирование белка репарации ДНК в поврежденном месте, активируя репарацию ДНК.
Для обнаружения белков репарации ДНК γH2AX и 53BP1 в сайтах DSB с помощью непрямой иммунофлюоресценции берут покровные стекла, содержащие эпителиальные клетки. Облучите подмножество клеток. Инкубируйте, позволяя необлученным и облученным клеткам контрольной группы расти в течение определенного времени.
Обработайте буфером для извлечения ядра клеток. Фиксируйте ядра клеток, чтобы сохранить их морфологию. Проводите лечение с помощью блокирующего раствора, чтобы свести к минимуму связывание неспецифических первичных антител.
Добавьте первичные антитела, нацеленные на два белка репарации ДНК. Антитела связываются с соответствующими белками.
Инкубируйте с вторичными антителами, помеченными красными и зелеными флуорофорами соответственно. Вторичные антитела, специфичные для каждого первичного антитела, связываются со своими мишенями. Добавьте монтажный материал, содержащий DAPI, на предметное стекло. Закрепите на нем покровные стекла для визуализации.
DAPI — ДНК-связывающий краситель — связывается с богатыми АТ малыми бороздками двух
Просмотрите полный транскрипт и получите доступ к тысячам научных видео