Анализ модуляции pH на поддерживаемых липидных бислоях для обнаружения белок-фосфоинозитидных взаимодействий
Энциклопедия экспериментов JoVE
Биологические методы
0 просмотров • 6:23 мин. • July 8th, 2025
Фосфатидилинозитол 4,5-бисфосфат, или PIP2, представляет собой микросвязанный мембранно связанный фосфорилированный фосфолипид. Фосфолипаза С, или ПЛК, со специфическими PIP2-связывающими доменами, связывается с PIP2, генерируя вторичные мессенджеры, необходимые для нескольких клеточных процессов.
Чтобы обнаружить взаимодействия PLC-PIP2 in vitro, начните с небольшой униламеллярной везикулы, SUV, кислотной суспензии, содержащей PIP2 и смесь фосфолипидов, один из которых конъюгирован с pH-чувствительным флуоресцентным красителем.
Нанесите раствор пипеткой во входное отверстие предварительно собранного изготовленного микрофлюидного устройства и подсоедините выходную трубку. Перенесите и закрепите прибор на предметном столике флуоресцентного микроскопа. Под действием силы тяжести внедорожники проходят через микроканал пола, выполненный из гидрофильного стекла покровного стекла.
Внедорожники адсорбируются на поверхности стекла, а pH раствора снижает электростатическое отталкивание между ними. Внедорожники взаимодействуют с поверхностью, деформируясь и сплавляясь, образуя большие везикулы.
После критического покрытия поверхности везикулы спонтанно разрываются, образуя поддерживаемый лип
Просмотрите полный транскрипт и получите доступ к тысячам научных видео