Количественная внутриклеточная водородная ЯМР-спектроскопия для мониторинга белково-лигандных взаимодействий

Чтобы контролировать взаимодействие белков-мишеней с низкомолекулярными тестовыми лигандами в нативной клеточной среде, начните с ЯМР-трубки, заполненной буфером, содержащим гелевую пробку в основании. Введите в ЯМР-трубку клетки-мишени, экспрессирующие белки, встроенные в агарозу, образуя нитевидные структуры.

Загрузите пробирку в проточный блок биореактора, подав питательную среду для поддержания жизнеспособности клеток. Вставьте проточный блок в прибор ядерного магнитного резонанса или ЯМР.

Под действием сильного магнитного поля атомные ядра атомов водорода белков намагничиваются и выстраиваются параллельно полю, адаптируясь к низкоэнергетическому состоянию.

Подайте радиочастотный импульс, заставляя ядра выравниваться антипараллельно магнитному полю, позволяя им переходить в более высокоэнергетические состояния.

После короткого импульса ядра возвращаются в исходное положение, излучая поглощенную энергию. Детектор улавливает эту энергию, генерируя ЯМР-спектр, представляющий резонансные частоты атома водорода. Каждый спектральный пик соответствует отдельному атому водорода в определенной электронной среде.

Добавьте молекулы лиганда в блок потока. Они проникают внутрь клеток, взаим