Энциклопедия экспериментов JoVE
Биологические методы
0 просмотров • 4:19 мин. • July 8th, 2025
Белковый олигомер представляет собой комплекс из нескольких белковых субъединиц, которые связаны друг с другом, образуя более крупную функциональную единицу.
Для определения молекулярной массы белковых мономеров и их олигомеров в растворе с помощью SEC-MALS, комбинации эксклюзионной хроматографии и многоуглового рассеяния света, начинают с колонки эксклюзионной хроматографии (SEC).
Колонка содержит пористые сферические гелевые шарики, похожие на сито, которые захватывают в себе молекулы меньшего размера. Уравновесьте колонку буфером, совместимым с нативным состоянием белка.
Загрузите образец, содержащий белковые мономеры и олигомеры, в верхнюю часть колонки.
Во время потока олигомеры проходят через межчастичное пространство колонны, в то время как мономеры попадают в поры гранул. Это приводит к тому, что белковые олигомеры большего размера перемещаются быстрее, чем мономера меньшего размера.
Направьте быстро элюирующие олигомеры, а затем медленно элюирующие мономеры к детектору MALS.
Когда они проходят через детектор, их освещает лазерный свет, который рассеивается под разными углами. Многосубъединичные олигомеры рассеивают больше света, чем мономер.
Интенсивность рассеянного света
Просмотрите полный транскрипт и получите доступ к тысячам научных видео