Конкурентный анализ связывания для выявления соединений, нарушающих рецептор-лигандные взаимодействия

Анализ конкурентного связывания выявляет малые молекулы, которые нарушают взаимодействия рецептор-лиганд путем конкурентного связывания с рецептором-мишенью, ингибируя естественное связывание лиганда.

Чтобы идентифицировать взаимодействие рецептора с его природным лигандом в присутствии рецептор-специфичного низкомолекулярного антагониста, начните с суспензии клеток Т-лимфоцитов человека, экспрессирующих рецептор-мишень.

Добавляйте клеточную суспензию в лунки многолуночного планшета, содержащего возрастающие концентрации антагонистов. Инкубировать. Антагонист связывается с ортостерическим сайтом связывания — естественным сайтом связывания лиганда рецептора.

Добавьте в лунки фиксированную концентрацию флуоресцентно меченных природных лигандов. Инкубировать.

При низких концентрациях антагонисты занимают несколько ортостерических участков связывания, что позволяет естественно связываться лигандом с рецепторами. Однако при более высоких концентрациях антагонисты занимают большую часть ортостерических сайтов связывания, обеспечивая минимальное естественное связывание лиганд-рецептор.

Центрифуга для гранулирования ячеек. Выбросьте надосадочную жидкость. Ресуспендируйте клетки в параформа