Репортерный анализ на основе ИФА для изучения взаимодействия рецептор-лиганд в клетках BW

Чтобы изучить рецептор-лигандные взаимодействия, начните с многолуночного планшета, содержащего среду с клетками-мишенями, экспрессирующими тестовые лиганды на своей поверхности.

Добавьте к этому сконструированные мышиные BW-клетки — новую популяцию B-клеток, экспрессирующую мембранно-связанные химерные рецепторы. Химерные рецепторы включают внеклеточный домен конкретного рецептора, слитый с трансмембранным и внутриклеточным сигнальным доменом рецептора В-клеток.

Лиганды на клетках-мишенях взаимодействуют с внеклеточным доменом химерных рецепторов клеток BW, вызывая активацию внутриклеточного сигнального домена в клетках BW. Это запускает нисходящую передачу сигналов и выработку цитокинов — секреторных репортерных молекул, которые высвобождаются за пределы клеток BW, появляясь в среде.

Центрифугируйте пластину. Перенесите содержащую цитокин надосадочную жидкость в планшет ИФА, предварительно покрытый антицитокиновыми антителами. Цитокины взаимодействуют с Fab-областями антител, что приводит к их иммобилизации на поверхности пластины.

Обработайте пластину блокирующим раствором для блокировки неспецифических мест связывания. Добавьте биотинилированные антицитокиновые антитела, которы