Культура in vitro и дифференцировка первичных моноцитов в макрофаги

Моноциты — это иммунные клетки, которые дифференцируются в макрофаги и антигенпрезентирующие дендритные клетки для защиты от инфекции.

Чтобы культивировать моноциты и индуцировать их дифференцировку in vitro, начните с приема суспензии первичных моноцитов человека в подходящей питательной среде. Добавьте клеточную суспензию в лунки культурального планшета. Инкубируйте в физиологических условиях, чтобы позволить клеткам прилипнуть.

Добавьте индуцирующие дифференцировку цитокины — гранулоцитарно-макрофагальный колониестимулирующий фактор, или GM-CSF, в одну лунку и макрофагальный колониестимулирующий фактор, или M-CSF, в другую. Инкубируйте в течение соответствующего времени.

GM-CSF связывается со своим гетеродимерным рецептором на клетках и индуцирует дифференцировку моноцитов. Связывание GM-CSF приводит к активации внутриклеточных сигнальных путей, что приводит к экспрессии генов прайминга в макрофагоподобный фенотип M1.

М1-подобные клетки — округлые клетки с большим цитоплазматическим объемом — являются провоспалительными и помогают в защите от инфекции.

В другой лунке M-CSF связывается со своим гомодимерным рецептором на моноцитах и индуцирует дифференцировку клеток. Связывание M-CSF приводит к активации внутриклеточных сигнальных путей, отличных от GM-CSF, что приводит к экспрессии генов прайминга в макрофагоподобный фенотип M2.

М2-подобные клетки с удлиненной формой обладают противовоспалительными свойствами и выполняют функции ремоделирования и восстановления тканей.

Дифференцированные клетки макрофагов готовы к дальнейшим последующим анализам.

После подсчета повторно суспендировать выделенные моноциты в соотношении 1 умножить на 10 до шестой клетки на миллилитр среды RPMI 1640 без сыворотки 37 градусов Цельсия с добавлением антибиотиков и выложить 1 миллилитр ресуспендированных клеток в 35-миллиметровые планшеты в шкафу биобезопасности. Затем поместите планшеты в инкубатор для клеточных культур на 30-60 минут, чтобы клетки могли прилипнуть к дну лунки.

Чтобы получить макрофаги с М1-подобным фенотипом, добавьте 100 микролитров фетальной бычьей сыворотки, содержащей 25 нанограммов на миллилитр GM-CSF, в каждую пластину. Чтобы получить макрофаги с М2-подобным фенотипом, добавьте 100 микролитров фетального быка, содержащего 50 нанограммов на миллилитр М-КСФ, в каждую пластину.