Выделение и культивирование мышиных клеток Купфера

Клетки Купфера являются резидентными макрофагами, локализованными в синусоидах печени, которые помогают защитить печень от инфекций.

Чтобы выделить мышиные клетки Купфера, возьмите свежесобранную перфузированную печень мыши в посуде со средой содержания. На этапе перфузии печени коллагеназой переваривается внеклеточный матрикс, вызывая диссоциацию клеток печени.

Разорвите капсулу печени для высвобождения диссоциированных клеток печени, включая паренхиматозные клетки, ПК и непаренхиматозные клетки, NPC, включая клетки Купфера, эндотелиальные клетки, звездчатые клетки и оставшиеся эритроциты.

Фильтр для удаления мусора. Выполните низкоскоростное дифференциальное центрифугирование фильтрата для выборочного осаждения ПК. Соберите NPC-содержащий надосадочную жидкость. Центрифуга для концентрации клеток.

Ресуспендируйте клетки в среде и слоях на прерывистом изотоническом градиенте плотности с двумя слоями градиентной среды различной плотности. При центрифугировании ячейки разделяются в зависимости от их плотности относительно градиентной среды.

Соберите обогащенный слой NPC на межфазном слое градиента. Переложите в пробирку, содержащую среду, и центрифугу. Засейте ресуспендированных NPC