Выделение мононуклеарных клеток периферической крови из оболочки человека

Мононуклеарные клетки периферической крови, PBMC, состоят из гетерогенной популяции специализированных иммунных клеток, включая лимфоциты, моноциты и дендритные клетки.

Чтобы выделить PBMC, начните с пробирки, содержащей свежеполученную кровь охристой шерсти человека. Кровь охристой шерсти содержит PBMC, а также гранулоциты с многолепестковыми ядрами, эритроциты и тромбоциты, взвешенные в плазме.

Тщательно наложите суспензию охристого покрытия на равный объем градиентной среды плотности с желаемой удельной плотностью, оптимальной для разделения PBMC.

Во время центрифугирования различные типы клеток разделяются на отдельные слои в зависимости от плотности клеток относительно градиентной среды. Кроме того, полисахариды в среде с градиентом плотности способствуют агрегации эритроцитов и седиментации.

Эритроциты и гранулоциты с более высокой плотностью оседают на дно пробирки, в то время как плазма с самой низкой плотностью образует самый верхний слой. PBMC, которые имеют более низкую плотность, чем среда с градиентом плотности, образуют мутный белый слой на границе раздела плазма — среда с градиентом плотности.

Снимите верхний слой плазмы. Осторожно соберите мутный слой, содержащий PB