Выделение и очистка В-клеток из периферической крови человека

Чтобы провести иммуномагнитное отрицательное разделение В-клеток, соберите периферическую кровь человека в пробирку, содержащую антикоагулянт, чтобы предотвратить свертывание крови. Добавьте эритроциты, эритроциты, буфер для лизиса эритроцитов, чтобы лизировать эритроциты, не затрагивая другие клетки крови.

Центрифуга для осаждения неповрежденных, более плотных клеток крови из менее плотно лизированных эритроцитов, которые остаются в надосадочной жидкости. Выбросьте надосадочную жидкость. Повторно суспендируйте гранулу в свежей среде.

Перенесите клетки в культуральную тарелку. Инкубируйте так, чтобы макрофаги и моноциты прилипли к пластине, в то время как неадгезивные клетки, включая В-клетки, остаются в суспензии.

Соберите клетки в суспензии в свежую пробирку. Центрифуга для гранулирования клеток и ресуспендирования их в буфере.

Добавьте раствор коктейля, содержащий биотинилированные антитела, специфичные для клеток крови, отличных от В-клеток. Антитела связываются с антигенами на поверхности не-В-клеток, оставляя В-клетки непомеченными.

центрифуга. Выбросьте надосадочную жидкость, содержащую несвязанные антитела.

Добавьте раствор стрептавидин-сопряженных магнитных шариков. Во вре