Функциональная оценка В-клеток, секретирующих антитела, с помощью анализа ELISpot

В-клетки, секретирующие антитела, или ASC, представляют собой дифференцированные В-клетки, которые секретируют изотипы антител, включая IgG и IgM, для обеспечения защиты от патогенов.

Чтобы выполнить функциональную оценку ASC in vitro, начните с точечного иммуноферментного анализа. Возьмите планшет ELISpot, содержащий в основании мембрану из активированного поливинилиденфторида.

Инкубируйте лунки с фрагментами поликлональных антител, содержащими исключительно Fab-области без Fc-области антитела. Каждая область Fab имеет сайт связывания для конкретных изотипов антител — IgG или IgM, что позволяет идентифицировать оба изотипа.

Во время инкубации фрагменты антитела прикрепляются к мембране, что приводит к иммобилизации.

Покройте лунки запорными растворами, чтобы предотвратить неспецифическое связывание. Засейте планшет активированными В-клетками, секретирующими антитела, и инкубируйте. ASC секретируют различные изотипы, включая IgG и IgM, которые связываются с мембраносвязанными фрагментами антител.

Промойте пластину буфером, чтобы удалить несвязанные секретируемые антитела. Обработайте некоторые лунки конъюгированными с ферментом антителами для обнаружения IgM, а другие — антителами