Выделение и культивирование стромальных клеток костного мозга из большеберцовой кости мыши

Стромальные клетки костного мозга, BMSC — предшественники линий скелетных тканей — находятся в полости костного мозга вместе с гетерогенной популяцией клеток, включая гемопоэтические стволовые клетки, ГСК и дифференцированные клетки крови.

Чтобы изолировать BMSC, начните со свежесобранной голени мыши. Разрежьте проксимальный и дистальный концы кости, чтобы обнажить полость костного мозга. Поместите разрезанную кость в адаптированную микропробирку, содержащую среду.

Центрифуга на высокой скорости вымывает костный мозг из кости и формирует гранулу костного мозга на дне пробирки. Извлеките кость из трубки. С помощью иглы, прикрепленной к шприцу, растирайте костный мозг, чтобы разбить комки.

Добавьте в суспензию среду. Профильтруйте через клеточное ситечко соответствующего размера ячеек, чтобы удалить костные отломки. Поместите фильтрат, содержащий клетки костного мозга, в пластиковую культуральную пластину.

Во время инкубации в течение соответствующей продолжительности BMSC прилипают к дну пластиковой культивальной пластины и размножаются, в то время как неадгезивные клетки, включая ГСК, остаются во взвешенном состоянии.

Откажитесь от среды, содержащей неадгезивные клетки. Используйте