Выделение естественных клеток-киллеров из ткани печени для селективной экспансии

Чтобы выделить естественные клетки-киллеры, или NK-клетки — специализированные белые кровяные клетки, участвующие во врожденном иммунитете, — начните с ткани печени человека, содержащей различные клеточные популяции, включая жиросодержащие клетки, эритроциты, гранулоциты, лимфоциты и другие связанные клетки, заключенные в богатый коллагеном внеклеточный матрикс или ВКМ.

Нарежьте ткань небольшими кусочками и перенесите их в пробирку, содержащую коллагеназу — протеолитический фермент. Коллагеназа расщепляет коллаген, разрушает матрикс и разрыхляет клетки, связанные с ВКМ.

Вставьте трубку в диссоциатор тканей. Эта механическая диссоциация еще больше разрушает ECM, высвобождая слабо прикрепленные клетки в раствор. Отфильтруйте содержимое, чтобы удалить непереваренную ткань и фрагменты ВКМ и собрать фильтрат, содержащий различные клетки.

Ресуспендируйте клетки в буфер, содержащий поливинилпирролидон или гранулы диоксида кремния, покрытые PVP. Шарики ПВП избирательно связываются с жиросодержащими клетками, эффективно отделяя их от остальных клеток.

Центрифугируйте на низкой скорости для гранулирования клеточной популяции; выбросьте надосадочную жидкость, содержащую мусор и жировые клетки