Распознавание CD-маркеров цитокин-индуцированных клеток киллеров человека методом проточной цитометрии

Цитокин-индуцированные киллеры, CIK, представляют собой гетерогенные иммунные клеточные популяции, полученные ex vivo из культур мононуклеарных клеток периферической крови (PBMC), стимулированных специфическими цитокинами и моноклональными антителами. Клетки CIK включают в себя клеточные популяции, в том числе CD3+CD56+ NK-T-клетки, CD3+CD56-T-клетки и CD3-CD56+ NK-клетки.

Чтобы определить долю клеток CIK, начните с пробирок, содержащих суспензию клеток CIK, полученную из PBMC. Добавить анти-CD3 и анти-CD56 антитела, конъюгированные с различными флуорофорами, и их смесь в назначенные пробирки. Добавьте контролируемые антитела изотипа, конъюгированные с аналогичными флуорофорами в качестве специфических антител, в другие пробирки.

Флуоресцентно меченные анти-CD3 и анти-CD56 антитела распознают и связываются с CD3 и CD56, экспрессируемыми в популяциях клеток CIK соответственно. Антитела контроля изотипа не обладают специфичностью целевого антигена, что облегчает измерение неспецифических фоновых сигналов.

Пипетируйте клетки в пробирки с круглым дном и крышками для клеточных фильтров, которые помогают удалять клеточные агрегаты. Загрузите пробирки в карусель проточного цитометра. Во в