Выделение иммунных регуляторных клеток Sertoli из семенных канальцев мышей

Семенные канальцы яичек содержат клетки Сертоли, которые питают половые клетки. Клетки Сертоли соединены плотными соединениями и прочно прикреплены к основанному матриксу, богатому гиалуроновой кислотой. Такое расположение клеток Сертоли регулирует проникновение иммунных клеток в канальцы и защищает развивающиеся половые клетки от деградации.

Чтобы выделить клетки Сертоли, начните с пробирки, содержащей частично переваренные семенные канальцы, полученные из яичек мыши. В этих канальцах отсутствуют перитубулярные клетки — гладкомышечные клетки, окружающие семенные канальцы.

Обработайте канальцы ферментным коктейлем, содержащим гиалуронидазу — необходимую для гидролиза гиалуроновой кислоты — и ДНКазу.

Гиалуронидазы проникают в канальцы и расщепляют гиалуроновую кислоту — базальный полисахарид — инициируя отделение клеток Сертоли от базального матрикса и высвобождая зародышевые клетки в раствор. ДНКаза переваривает любые загрязнения ДНК из раствора, предотвращая агрегацию клеток.

Промойте ферментативно переваренные канальцы буфером, удаляя остатки ферментов, клеточных фрагментов и половых клеток. Переваренные канальцы снова суспензируются и загрузите суспензию в игольчато-шприцевой уз