Селективное выделение CD4^{+ Vδ1+} γδ Т-клеток из мононуклеарных клеток периферической крови человека

γδ Т-клетки экспрессируют Т-клеточные рецепторы, TCR, состоящие из гамма- и дельта-цепей с вариабельными и постоянными доменами.

CD4+ Vδ1+ Т-клетки — субпопуляция γδ Т-клеток — совместно экспрессируют вариабельную цепь Vδ1 и корецептор CD4. Эти клетки мигрируют в воспаленные ткани и трансдифференцируются в функционально зрелые CD4+ или CD8+ αβ Т-клетки, опосредуя иммунный ответ.

Для выделения CD4+ Vδ1+ Т-клеток из мононуклеарных клеток периферической крови человека, PBMC, ресуспендируют клетки в буфере. Используйте Fc-блокирующий реагент для блокирования Fc-рецепторов на клеточной поверхности и предотвращения связывания неспецифических антител.

Добавьте анти-Vδ1 антитела, конъюгированные с флуорофором FITC, которые связываются с Vδ1-антигенами γδ Т-клеток. Инкубируют с магнитными микрогранулами, связанными с антителами против FITC, которые прикрепляются к красителю FITC на антителах, связанных с Vδ1 Т-клетками.

Пропустите смесь через магнитную колонку для привлечения связанных с шариками Vδ1+ Т-клеток; Vδ1-Т-клетки останутся несвязанными и впоследствии вымываются наружу. С усилием промывайте колонку, проталкивая через нее буфер, чтобы отделить Vδ1+ Т-клетки.

Инкубируйте клетки с ма