Энциклопедия экспериментов JoVE
Иммунология
0 просмотров • 4:49 мин. • July 8th, 2025
Внеклеточные ловушки макрофагов (MET) представляют собой паутинистые структуры, выделяемые макрофагами для улавливания и уничтожения патогенов.
МЕТ содержат внеклеточные хроматиновые волокна, связанные с матриксной металлопротеиназой-9, ММП-9 и цитруллинированным гистоном H3, H3Cit — модифицированным белком гистона, в котором аргинин превращается в цитруллин.
Чтобы охарактеризовать МЕТ в фиксированных формалином и залитых парафином срезах легочной ткани мышей, во-первых, высушите предметные стекла. Погрузите в ксилол для депарафинизации срезов. Используйте водный этанол для регидратации секций.
Нагрейте срезы, чтобы разорвать индуцированные формалином белковые сшивки, обнажая целевые антигены для последующего связывания антител.
Добавьте раствор, содержащий белок, чтобы блокировать неспецифические сайты связывания. Инкубируйте с коктейлем первичных антител против MMP-9, против H3Cit и против F4/80.
Антитело против F4/80 связывается с поверхностным гликопротеином F4/80 макрофагальной клетки. Антитела против MMP-9 и H3Cit связываются с MMP-9 и H3Cit в МЕТ соответственно. Добавляйте различные флуорофор-конъюгированные вторичные антитела, которые связываются с соответствующими первичны
Просмотрите полный транскрипт и получите доступ к тысячам научных видео