Прижизненная визуализация гамма-дельта интраэпителиальных лимфоцитов

Гамма-дельта интраэпителиальные лимфоциты, γδ IEL, являются специализированными мигрирующими Т-клетками, экспрессирующими гамма-дельта Т-клеточные рецепторы. Эти клетки преимущественно находятся в эпителии кишечника и патрулируют эпителий, ограничивая транслокацию патогена по кишечнику.

Чтобы визуализировать γδ ИЭЛ в живом организме, начните с трансгенной мыши, находящейся под наркозом, с частично обнаженным тонким кишечником. Трансгенная мышь генетически модифицирована для экспрессии репортерных белков — усиленных зеленых флуоресцентных белков — исключительно в γδ IEL, что позволяет отслеживать их.

С помощью электрокаутерии создайте линию перфорации над обнаженной тонкой кишкой вдоль антиментериальной поверхности, предотвращая чрезмерное кровотечение.

Сделайте продольный разрез над линией перфорации, чтобы обнажить слизистую оболочку кишечника, обнажив множественные пальцеобразные выступы — ворсинки. Каждая ворсинка содержит эпителиальные клетки с проживающими γδ IEL, которые выступают в просвет кишечника.

Расположите мышь так, чтобы открытая поверхность слизистой оболочки находилась непосредственно в контакте с флуоресцентным красителем, придавая просвет красной флуоресценции.

Пр