Обогащение и экспансия антиген-специфичных CD8+ Т-клеток на основе наночастиц

Мацерацию мышиной селезенки и лимфатических узлов на клеточном ситечке. Промойте ситечко подходящим буфером для сбора спленоцитов и лимфоцитов.

Инкубируйте клетки с помощью биотинилированного коктейля антител и магнитных микрогранул антибиотина, которые связываются с клетками, не относящимися к CD8+.

Пропустите клеточную суспензию через магнитную колонку. Благодаря магнитной силе связанные с шариками не-CD8+ клетки связываются со стенкой колонки, в то время как CD8+ Т-клетки вымываются наружу.

Инкубируйте элюированные клетки с искусственными антигенпрезентирующими клетками, aAPC. Это магнитные наночастицы, функционализированные основным комплексом гистосовместимости, нагруженным антигеном, гибридным белком иммуноглобулина, MHC-Ig и антителом против CD28.

Нагруженные антигеном MHC-Igs связываются с различными рецепторами на антиген-специфических CD8+ Т-клетках. Антитела к CD28 взаимодействуют с рецепторами CD28 Т-клеток, инициируя активацию Т-клеток.

Поместите пробирку с магнитными наночастицами и клеточной смесью на магнитную подставку. CD8+ Т-клетки, связанные с aAPC, притягиваются к магнитному полю, в то время как неспецифические CD8+ Т-клетки остаются во взвешенном состоянии. Уд