Мечение мышиных Т-хелперных лимфоцитов с помощью радиоактивно меченых моноклональных антител
JoVE Encyclopedia of Experiments
Иммунология
0 просмотров • 3:28 мин • July 8th, 2025
Для радиоактивного мечения мышиных Т-хелперов, Th-лимфоцитов, несущих Т-клеточный рецептор TCR, специфичный для куриного пептида овальбумина, берут пробирку, содержащую радиоактивно меченые моноклональные антитела, mAb, с желаемой радиоактивной активностью.
mAb содержит мышиный mAb, специфичный для TCR, экспрессируемый на мембране Th-лимфоцитов мыши. Хелатор конъюгирует mAb и изотоп меди, излучающий позитроны, образуя стабильный комплекс.
Разбавьте меченные радиоактивными веществами мАТ физиологическим раствором. Затем добавьте разведенные меченые радиоактивными метками мАТ в многолуночный планшет, содержащий суспензию Th-лимфоцитов. Кратко высиживайте.
В культуре меченые радиоактивными метками mAb связываются с TCR на мембранах Th-лимфоцитов. После инкубации перенесите клеточную суспензию в свежую пробирку.
центрифуга. Выбросьте надосадочную жидкость, содержащую несвязанные антитела, меченные радиоактивными метками. Ресуспендируют Th-лимфоциты в среду и переносят в многолуночный планшет. Инкубируйте в течение длительного времени.
Радиоактивно меченое связывание mAb-TCR вызывает рекрутирование адапторных белков на цитоплазматическую сторону плазматической мембраны, с которыми трискелионы клатрина связываются и образуют ямку, покрытую клатрином.
Вспомогательные белки помогают отщемлять везикулу от плазматической мембраны, способствуя интернализации меченого радиоактивным комплексом mAb-TCR в цитоплазму. В конечном счете, TCR реэкспрессируются на мембранах Th-лимфоцитов.
Меченые радиоактивными Th-лимфоцитами готовы к дальнейшим экспериментам.
Для радиоактивного мечения овальбумин-специфичных TH1-клеток курицы сначала используйте калибратор дозы, чтобы набрать 37 мегабеккерелей интересующего Т-клеточного радиоактивного антитела в шприц без мертвого объема.
Затем выдавите антитело в реакционный стаканчик, измерьте и вычтите оставшееся количество реактивности в шприце из количества, которое было набрано. Затем добавьте один миллилитр физиологического раствора в чашку, чтобы получить раствор с мощностью 37 мегабеккерелей на миллилитр.
Затем добавьте два раза по 10 к шестой клетке OVA-TH1 в 0,5 мл полной среды в каждую лунку 48-луночного планшета, а затем 20 микролитров раствора радиоактивно меченного антитела. Через 30 минут в радиационно-безопасном инкубаторе для клеточных культур с температурой 37 градусов Цельсия и 7,5% углекислым газом объедините меченые радиоактивными метками клетки в 50-миллилитровую коническую пробирку для двух промывок в 10 миллилитрах при температуре 37 градусов Цельсия PBS.
Обзор
В данной статье описывается метод радиоактивного мечения Т-хелперов мыши, экспрессирующих Т-клеточный рецептор, специфичный к пептиду овальбумина курицы. Процесс предполагает использование радиоактивно меченных моноклональных антител для облегчения интернализации комплекса TCR в цитоплазму лимфоцитов.
Основные компоненты исследования
Область науки
- Нейробиология
- Иммунология
- Клеточная биология
Теоретические основы
- T-хелперы играют важнейшую роль в иммунном ответе.
- Методы радиоактивного мечения необходимы для отслеживания и изучения клеточных взаимодействий.
- Понимание динамики TCR может дать представление о функциях иммунитета.
- Овальбумин куриного яйца является модельным антигеном, используемым в иммунологических исследованиях.
Цель исследования
- Разработать надежный метод радиоактивного мечения Т-хелперов.
- Изучить процесс интернализации TCR при связывании с радиоактивно меченными антителами.
- Подготовить радиоактивно меченные Т-хелперы для дальнейшего использования в экспериментах.
Используемые методы
- Приготовление радиоактивно меченных моноклональных антител, специфичных к TCR.
- Инкубация Th-лимфоцитов с радиоактивно меченными антителами.
- Центрифугирование для удаления несвязавшихся антител.
- Ресуспендирование клеток для дальнейших экспериментов.
Основные результаты
- Успешное связывание радиоактивно меченных мАТ с TCR на Th-лимфоцитах.
- Интернализация комплекса мАТ-TCR в цитоплазму.
- Повторная экспрессия TCR на мембранах лимфоцитов после интернализации.
- Подготовка радиоактивно меченных Th-лимфоцитов для последующих исследований.
Выводы
- Данный метод позволяет эффективно маркировать Th-лимфоциты для последующего отслеживания и анализа.
- Результаты этого исследования могут расширить понимание динамики Т-клеток.
- Эту методику можно применять в различных контекстах иммунологических исследований.
Часто задаваемые вопросы
Практическая значимость для промышленности
Радиоактивное мечение Т-хелперов мышей моноклональными антителами позволяет осуществлять точное неинвазивное отслеживание перемещения иммунных клеток с помощью ПЭТ/КТ-визуализации. Эта возможность способствует валидации мишеней на ранних стадиях и снижению механистических рисков при разработке лекарственных препаратов в области иммунологии. Данный подход повышает прогностическую достоверность стратегий иммуномодуляции и служит основой для принятия решений по формированию портфеля разработок в области иммуноонкологии и исследований аутоиммунных заболеваний.
Стратегическое применение в биофармацевтических исследованиях и разработках
Первичный поиск и валидация мишени
- Обеспечивает прямую визуализацию миграции антигенспецифических Т-клеток in vivo для проверки гипотез.
- Поддерживает функциональную валидацию иммунных мишеней путем мониторинга связывания и интернализации TCR.
- Способствует снижению механистических рисков за счет выяснения клеточного ответа на связывание антител.
- Повышает прогностическую уверенность в стратегиях модуляции иммунных путей.
Скрининг и разработка методов анализа
- Обеспечивает стандартизированный метод получения радиоактивно меченных иммунных клеток для последующих анализов.
- Гарантирует воспроизводимость и количественную оценку взаимодействий между антителами и клетками.
- Позволяет подготавливать валидированные популяции клеток для скрининговых платформ на основе визуализации.
- Обеспечивает надежную оценку влияния соединений на трафик иммунных клеток.
Трансляционные и доклинические исследования
- Сопоставляет результаты доклинической визуализации с динамикой иммунных клеток, значимой для развития заболевания.
- Обеспечивает преемственность от валидации in vitro до отслеживания in vivo на моделях животных.
- Поддерживает продвижение кандидатов, нацеленных на иммунную систему, с учетом оценки рисков.
- Предоставляет трансляционные биомаркерные данные о локализации и персистенции иммунных клеток.
Интеграция в конвейер и рабочий процесс
Данный метод радиоактивного мечения интегрируется в процесс перехода от этапа поиска к доклиническим исследованиям, обеспечивая поддержку как ранних механистических исследований, так и рабочих процессов трансляционной визуализации.
- Открывающая биология: способствует проверке гипотез, касающихся таргетинга и трафика Т-клеточных рецепторов.
- Скрининг: обеспечивает воспроизводимое количественное мечение клеток для анализов на основе методов визуализации.
- Аналитика: предоставляет данные ПЭТ/КТ для сравнения распределения иммунных клеток при различных условиях.
- Трансляционные исследования: связывает валидацию in vitro с отслеживанием иммунных клеток in vivo в доклинических моделях.
- Повторное использование в масштабах предприятия: создает многократно используемую платформу для радиоактивного мечения различных популяций иммунных клеток.
Операционное и корпоративное воздействие
- Научная ценность: повышает достоверность прогнозов в исследованиях таргетинга и миграции иммунных клеток.
- Операционная ценность: стандартизирует рабочие процессы радиомаркировки и визуализации для анализа иммунных клеток.
- Стратегическая ценность: служит основой для принятия решений о целесообразности дальнейшей разработки иммуномодулирующих терапевтических средств.
- Влияние на портфель: обеспечивает приоритизацию активов в области иммунологии и иммуноонкологии с учетом оценки рисков.
Особенности реализации
- Требуется опыт работы в области радиохимии и манипуляций с иммунными клетками.
- Необходим доступ к ПЭТ/КТ-визуализации и инфраструктуре для калибровки дозы.
- Требуется стандартизация между исследовательскими группами для обеспечения воспроизводимости мечения клеток и визуализации.
- Может потребоваться адаптация метода для различных типов иммунных клеток или рецепторных мишеней.
- Обязательным является соблюдение протоколов радиационной безопасности и нормативных требований.
Часто задаваемые вопросы по биофармацевтике
Всего животного визуализации и проточной цитометрии методы анализа антиген-специфических CD8 + Т-клеточные ответы после вакцинации наночастиц
Похожие видео
0 Просмотры
Автоматизированный радиохимический синтез [
Похожие видео
0 Просмотры
Неинвазивная ПЭТ/МРТ визуализация на ортотопической мышиной модели гепатоцеллюлярной карциномы
Похожие видео
0 Просмотры
Методы оценки бета опосредованная гибель клеток от цитотоксических Т-лимфоцитов
Похожие видео
0 Просмотры
Иммунологическая методика мониторинга адъювант-опосредованной генерации цитотоксических Т-лимфоцитов
Похожие видео
0 Просмотры
Проверка нано- и антител Based
Похожие видео
0 Просмотры
Индукционная мышиных воспаление кишечника с помощью приемных передачи эффекторных CD4
Похожие видео
0 Просмотры
Выделение и активация мышиных лимфоцитах
Похожие видео
0 Просмотры
Мышиные лимфоцит Этикетировочное по
Похожие видео
0 Просмотры
In Vitro и In Vivo Оценка T, B и миелоидных клеток подавляющих активность и гуморальные ответы от пересадки получателей
Похожие видео
0 Просмотры
Последнее обновление: 29 августа 2026