Метод in vitro для дифференцировки Т-хелперов, продуцирующих GM-CSF, от наивных Т-клеток

Гранулоцитарно-макрофагальный колониестимулирующий фактор, GM-CSF секретируется GM-CSF-продуцирующими Т-хелперами или_T-HGM-клетками. Эти клетки демонстрируют низкую экспрессию других цитокинов, специфичных для Т-хелперных клеток.

Чтобы начать in vitro дифференцировку_{ТГ-клеток}, необходимо принять суспензию Т-хелперов, выделенную из селезенки мыши, содержащую антиген-активированные зрелые клетки и недифференцированные наивные клетки.

Добавьте флуоресцентно меченные антитела, нацеленные на характерные поверхностные маркеры наивных и зрелых клеток. Проведите флуоресцентно-активируемую сортировку клеток для выделения наивных Т-клеток.

Поместите клетки в лунку, покрытую антителами, которые связываются с Т-клеточным рецепторным комплексом. Добавьте антитело, которое связывается с костимулирующим рецептором. Синергетическое связывание активирует клетки.

Добавьте интерлейкин 7 — цитокин, индуцирующий дифференцировку в_{ТГ-клетки}и продукцию GM-CSF. Добавьте форбол миристата ацетат, PMA — провоспалительное соединение, иономицин — ионофор кальция и ингибитор транспорта белка.

ПМА проникает в клетку и активирует протеинкиназу. Мембранопроницаемый иономицин перемещает ионы кальция внутри клетки, п