JoVE Encyclopedia of Experiments
Иммунология
0 просмотров • 2:41 мин • July 8th, 2025
Активация В-клеток включает в себя распознавание антигенов рецепторами В-клеток, BCR, на их поверхности, чтобы вызвать иммунный ответ.
Чтобы изучить активацию В-клеток in vitro, начните с покровного стекла, содержащего антигены и антитела против CD45R, иммобилизованного на полимерном материале. Отрицательно заряженные антигены и антитела взаимодействуют с положительно заряженными полимерами на покровном стекле посредством электростатических взаимодействий.
Накройте покрытые покровные стекла средой, содержащей В-клетки, и инкубируйте. CD45R — трансмембранный белок В-клеток — взаимодействует с иммобилизованными антителами, способствуя клеточной адгезии.
BCR на адгезивной В-клетке взаимодействуют с антигеном, образуя иммунный синапс — координационную область для клеточной сигнализации и интернализации антигена. Это способствует ремоделированию цитоскелета и инициирует распространение клеток, что увеличивает поверхность клетки, контактирующей с антигенами.
Дальнейшее ремоделирование вызывает движение BCR-сопряженных антигенов к центру иммунного синапса. Эта клеточная перестройка вызывает смещение центросомы вблизи синаптической мембраны, которая направляет внутриклеточные органеллы, включая лизосомы, к синапсу.
Слияние лизосом с мембраной приводит к интернализации комплексов антиген-BCR. Интернализованные антигены перерабатываются в пептидные фрагменты, загружаются в основной комплекс гистосовместимости класса II или молекулы MHC и, наконец, представляются на активированных В-клетках.
Приготовьте раствор антигена, добавив анти-BCR и B220 в PBS до конечной концентрации 10 мкг/мл и 7,5 мкг/мл соответственно. Далее установите покровную крышку над крышкой из 24-луночной пластины, накрытой парафиновой пленкой, и добавьте 40 микролитров раствора антигена. Закройте пластину, а затем выдерживайте при четырех градусах в течение ночи.
Чтобы запустить активацию в coverslip, сначала промойте их PBS, и дайте им высохнуть в течение нескольких минут. Затем добавьте 150 000 В-клеток и инкубируйте при температуре 37 градусов в разные временные точки. В обоих случаях, при активации бусинами или предметными стеклами, покрытыми антигеном, мы рекомендуем начать с самого длинного временного момента, а затем переходить к более коротким.
В данной статье представлен протокол in vitro для изучения динамики органелл в B-клетках в процессе формирования иммунного синапса. Метод сосредоточен на последовательности событий, следующих за распознаванием антигена B-клеточными рецепторами (BCR), включая перестройку цитоскелета, формирование иммунного синапса, перемещение лизосом, интернализацию антигена и презентацию антигена на молекулах MHC II класса.
Активация B-клеток in vitro на покровных стеклах, покрытых антигеном, позволяет детально изучить формирование иммунного синапса и динамику органелл, что способствует открытиям в области иммунологии на ранних этапах. Данная система обеспечивает понимание механизмов процессинга и презентации антигена, что помогает в валидации мишеней и снижении рисков при разработке иммунотерапевтических средств. Этот подход повышает прогностическую точность последующего скрининга и трансляционных исследований адаптивного иммунитета.
Данный метод интегрируется в общий процесс исследований — от ранних механистических studies до доклинических иммунологических исследований, обеспечивая как валидацию мишеней, так и готовность анализа.
Похожие видео
0 Просмотры
Похожие видео
0 Просмотры
Похожие видео
0 Просмотры
Похожие видео
0 Просмотры
Похожие видео
0 Просмотры
Похожие видео
0 Просмотры
Похожие видео
0 Просмотры
Похожие видео
0 Просмотры
Похожие видео
0 Просмотры
Похожие видео
0 Просмотры
Последнее обновление: 29 августа 2026