Энциклопедия экспериментов JoVE
Иммунология
0 просмотров • 3:20 мин. • July 8th, 2025
Чтобы вызвать колит — воспалительное заболевание кишечника — у мышей, возьмите мышь, содержащуюся в клетке.
Замените питьевую воду раствором декстрана сульфата натрия, ДСС, полисахарида, вызывающего колит. Дайте мышке употребить раствор для развития колита.
При употреблении DSS попадает в просвет толстой кишки мыши. Толстая кишка содержит толстый слой слизи, обеспечивающий физический барьер между комменсальными микробами и нижележащим монослоем эпителиальных клеток.
ДСС проникает в слой слизи, попадая в эпителиальные клетки. Внутри клеток DSS изменяет экспрессию белков плотных соединений и вызывает апоптоз, что приводит к нарушению эпителиального слоя и слизистого барьера. Это позволяет проникать просветным микробам в собственную пластинку — подлежащую ткань с резидентными дендритными клетками и макрофагами.
Иммунные клетки распознают микробы, активируя нисходящую передачу сигналов для секреции провоспалительных цитокинов. Цитокины вызывают инфильтрацию большого количества Т-клеток, которые вызывают преувеличенный иммунный ответ, что приводит к воспалению.
Следите за обработанной мышью на предмет желудочно-кишечных расстройств и потери веса, указывающих на начало колита.
Усыпите мышь, хирургическим путем изолируйте всю толстую кишку. Разделите толстую кишку на проксимальный, средний и дистальный отделы и добавьте фиксатор для сохранения тканей.
Ткань готова к последующим анализам для оценки колита.
Чтобы вызвать декстрансульфат натрия или колит DSS, замените обычную питьевую воду 3% раствором DSS в неограниченном количестве в течение семи дней, измеряя массу тела каждой мыши, потребление раствора DSS и выработку стула ежедневно. В конце семидневного лечения поместите мышь в положение лежа на спине и с помощью маленьких ножниц сделайте трехсантиметровый разрез по средней линии в области живота.
Затем с помощью щипцов приподнимайте толстую кишку, чтобы отделить ее от окружающей брыжейки, и извлекайте всю толстую кишку до тех пор, пока не станут видны слепая кишка и прямая кишка. Пересеките ткань у колоноцекального края и глубоко в области таза, чтобы освободить проксимальный и дистальный отделы ободочной кишки соответственно.
Измерьте и запишите длину изолированной толстой кишки и используйте 10-миллилитровый шприц, оснащенный иглой для зондажа, чтобы промыть толстую кишку 10 миллилитрами ледяного PBS для удаления кала и крови до тех пор, пока элюат не станет прозрачным. Для гистологической идентификации разделите образцы тканей на равные по размеру проксимальный, средний и дистальный срезы и зафиксируйте ткани в 4% параформальдегиде на ночь при температуре четыре градуса Цельсия.