Внутригрудная наноинъекция вируса для изучения взаимодействия вируса с хозяином у взрослых мух

0 просмотров3:52 мин • July 8th, 2025

Возьмите под наркозом самца дрозофилы дикого типа и мутанта Dicer-2 на инъекционной чашке под стереомикроскопом. Убедитесь, что в мухах нет симбиотических бактерий, подавляющих репликацию РНК-вирусов.

Инокулируйте мух внутригрудным путем с помощью нано-инъектора, содержащего суспензию одноцепочечной РНК вируса с положительным смыслом.

Вирус проникает в клетку-хозяина через рецептор-опосредованный эндоцитоз и реплицируется, продуцируя двухцепочечную промежуточную РНК. Рецептор распознавания образов хозяина Dicer-2 перерабатывает вирусную двухцепочечную РНК в небольшие интерферирующие РНК, миРНК.

МиРНК связывается с индуцированным РНК сайленсинговым комплексом RISC, где ее комплементарная цепь удаляется. Нагруженные RISC миРНК связываются с другими вирусными РНК посредством комплементарного спаривания оснований, вызывая деградацию вирусной РНК и сайленсинг генов.

Взаимодействие dicer-2 и вирусной РНК активирует нисходящие противовирусные сигнальные каскады, продуцирующие противовирусные белки. Эти противовирусные белки взаимодействуют с янус-киназой соседних клеток-хозяев, или JAK, связанными с белками цитокиновыми рецепторами, инициируя димеризацию рецепторов и фосфорилирование JAK.

Активированные JAKs фосфорилируют и активируют белки STAT, преобразователь сигнала и активатор транскрипции. Активированные STATs транслоцируются в ядро и связываются со специфическими последовательностями ДНК, инициируя транскрипцию генов противовирусного ответа.

Выращивайте мух в течение желаемого периода.

Последующий анализ указывает на снижение выживаемости и увеличение вирусной нагрузки у мутантных мух Dicer-2.

При вирусной инфекции сначала с помощью стереомикроскопа и тонких щипцов нужно сломать кончик стеклянной капиллярной иглы до подходящего диаметра для наноинъекции. Чтобы собрать инжектор, поместите уплотнительное уплотнительное кольцо и белую распорку на металлический поршень инжектора большой ямкой наружу.

С помощью шприца, оснащенного иглой 30-го калибра, заполните стеклянную иглу минеральным маслом и поместите иглу через кольцо. Поместите большее уплотнительное кольцо вокруг основания кольца, примерно в 1 миллиметре от тупого конца иглы, и установите иглу на поршень инжектора.

Закрепите иглу на поршне и нажмите пустую кнопку, чтобы продлить поршень микроинъектора до тех пор, пока не раздастся звуковой сигнал. Теперь нажмите Заполнить, чтобы втянуть поршень на 5 миллиметров, и окуните иглу в 100 бляшечно-образующую единицу вирусной суспензии. Осторожно встряхните один или по крайней мере три флакона с 20 самцами дрозофилы, не содержащими волбахии, в чашку для инъекций.

Предпочтение отдается самцам мух, так как гормональные изменения во время спаривания и размножения могут повлиять на показания у самок.

Затем введите в грудную клетку каждой мухи 50,6 нанолитров раствора вируса в область чуть более светлого цвета между мезоплеврой и тетраплеврой и измерьте нагрузку DCV с помощью анализа цитопатического эффекта и количественной ОТ-ПЦР у наземных мух, как показано выше. После инъекции осторожно переложите мух в свежий флакон и поместите флакон в горизонтальное положение, чтобы предотвратить прилипание мух к среде во время восстановления после анестезии.

09:32

Устные бактериальной инфекции и осыпания в Drosophila melanogaster

Похожие видео

0 Просмотры

05:06

Аллотрансплантация опухоли у Drosophila melanogaster с программируемым авто-нанолитрным инъектором

Похожие видео

0 Просмотры

03:16

Дрозофила меланогастер Протокол инжекции личинок

Похожие видео

0 Просмотры

08:20

RNAi Скрининг на хост факторов, участвующих в Vaccinia Вирусной инфекции использованием Drosophila Ячейки

Похожие видео

0 Просмотры

03:23

Инъекция взрослой мухи дрозофилы: метод доставки соединения или этикетки

Похожие видео

0 Просмотры

03:37

Заражение мух бактериальной суспензией с помощью наноинъектора

Похожие видео

0 Просмотры

03:49

Люциферазо-флуоресцентный репортерный вирус гриппа для отслеживания вирусных инфекций

Похожие видео

0 Просмотры

09:07

Использование данио рерио модели человеческого вируса гриппа А инфекций экрана противовирусных препаратов и характеризации иммунных клеток-хозяев ответов

Похожие видео

0 Просмотры

06:02

Арбовирусных инфекций как скрининг инструменты для выявления вирусной иммуномодуляторов и принимающих противовирусное факторов

Похожие видео

0 Просмотры

08:01

Изображений взаимодействия клеток в слизистой оболочки трахеи во время инфекции вируса гриппа с помощью двух Фотон прижизненной микроскопии

Похожие видео

0 Просмотры

Последнее обновление: 29 августа 2026