Количественная оценка медиаторов воспаления в инфицированных клетках, полученных из тканей человека

Во время инфекции активированные лимфоциты высвобождают медиаторы воспаления — цитокины — чтобы вызвать иммунный ответ.

Чтобы количественно определить медиаторы воспаления в инфицированной ткани, начните с клеточной суспензии, содержащей иммунные клетки, полученные из легочной ткани человека.

Инкубируйте клетки с Haemophilus influenzae — респираторной патогенной бактерией. Поверхностные антигены бактерий взаимодействуют с рецепторами распознавания образов на фагоцитарных иммунных клетках. Это инициирует интернализацию бактерий, процессинг в более мелкие пептиды и презентацию пептида основной молекулой комплекса гистосовместимости.

Молекула антигена MHC-II на фагоцитарных клетках связывается с Т-лимфоцитами через рецепторы Т-клеток, наряду с костимулирующими взаимодействиями рецепторов, что приводит к активации Т-лимфоцитов и выработке провоспалительных цитокинов.

Обрабатывайте клетки блокаторами Гольджи, нарушающими высвобождение цитокинов, вызывающих их накопление внутри клеток. Промойте клетки блокирующим буфером, чтобы заблокировать неспецифические сайты связывания.

Окрашивайте клеточную суспензию смесью меченых флуорофорами антител, которые специфически связываются с маркерами