Энциклопедия экспериментов JoVE
Иммунология
0 просмотров • 3:47 мин. • July 8th, 2025
Бактерии, помеченные опсонинами, распознаются по специфическим нейтрофильным рецепторам, что вызывает фагоцитоз активных форм кислорода, или АФК, высвобождение и бактериальную деградацию.
Чтобы количественно оценить продукцию нейтрофилов АФК in vitro, возьмите многолуночный планшет. Тестовая лунка содержит биопленку Staphylococcus aureus, содержащую бактерии, встроенные в пленку внеклеточного матрикса. Контрольная лунка находится без биопленки.
Инкубируйте биопленку с сывороткой крови человека, позволяя сывороточным опсонинам опсонизировать биопленку.
Отсадите сыворотку. Промойте буфером, удаляя несвязанные опсонины. Добавьте в лунки нейтрофилы и люминол — хемилюминесцентное соединение. Центрифуга, поднося нейтрофилы к биопленке.
С помощью считывателя пластин измерьте люминесценцию с течением времени.
В лунке, содержащей биопленку, нейтрофилы связываются с опсонинами биопленки, вызывая активацию нейтрофилов и интернализацию бактерий в фагосомы. Активируются специфические сигнальные пути, вызывающие сборку NADPH-оксидазы на фагосомах.
Оксидаза NADPH катализирует перенос электронов от NADPH к молекулярному кислороду, генерируя АФК, которые разлагают бактерии. Кроме того, NADPH-оксида
Просмотрите полный транскрипт и получите доступ к тысячам научных видео