Количественная оценка бактериальной инфекции в клетках-хозяевах с помощью анализа колониеобразующих единиц

Чтобы начать анализ колониеобразующей единицы, или КОЕ, для количественного определения жизнеспособных бактерий, возьмите многолуночный планшет, содержащий культивируемые макрофаги в питательных средах. Инфицируйте макрофаги Listeria monocytogenes, патогенной бактерией, способной к внутриклеточному росту.

Во время инфекции макрофаги поглощают бактерии, интернализуя бактерии в мембранном компартменте — фагосоме.

Бактерии выделяют порообразующий токсин и разрушают фагосомную мембрану. Таким образом, бактериям разрешается проникать в цитозоль и размножаться в макрофагах.

Кратко обработайте инфицированные макрофаги гентамицином, антибиотиком, который избирательно устраняет неинтернализованные бактерии, сохраняя при этом внутриклеточные бактерии.

Аспирируйте вышележащую среду, содержащую антибиотики. Далее добавьте стерильную дистиллированную воду поверх инфицированных макрофагов, создав гипотоническую среду. Это приводит к осмосу, когда молекулы воды попадают в клетки и вызывают лизис макрофагов, высвобождая внутриклеточные компоненты, в том числе бактерии.

Распределите клеточный лизат, содержащий внутриклеточные бактерии, на лизогенную агаровую пластину, способствуя разделению отдельн