Энциклопедия экспериментов JoVE
Иммунология
0 просмотров • 4:21 мин. • July 8th, 2025
Возьмите многолуночный планшет, содержащий культуру макрофагов. Инфицировать флуоресцентными белками, экспрессирующими Listeria monocytogenes, Lm.
Белки на Lm связываются со специфическими рецепторами макрофагов, интернализуя бактерии в фагосоме. Кроме того, Lm выделяет порообразующие токсины, которые разрушают фагосомную мембрану, высвобождая бактерии в цитозоль, где они размножаются и окружаются актиновыми филаментами хозяина.
Белки ActA, индуцирующие сборку актина, на Lm индуцируют непрерывную полимеризацию актина в задней части бактерии. Сгенерированный хвост актиновой кометы продвигает Lm через цитозоль и проникает через мембрану клетки макрофага, высвобождая в среду полимеризованный Lm, покрытый актином.
После инкубации соберите и закрепите внеклеточные, связанные с актином, Lm-содержащие среды из набора лунок. Зафиксируйте Lm с помощью параформальдегида. Добавьте дистиллированную воду, разрывая макрофаги и высвобождая внутриклеточный Lm. Соберите внутриклеточный Lm и зафиксируйте образец с помощью параформальдегида.
В других лунках замените среды непроницаемыми для клеток гентамицинсодержащими средами для устранения внеклеточного Lm. Замените на свежие среды и выдержите в те
Просмотрите полный транскрипт и получите доступ к тысячам научных видео