Заражение мух бактериальной суспензией с помощью наноинъектора

Чтобы заразить мух, начните со стеклянной иглы узкого диаметра, наполненной минеральным маслом.

Закрепите иглу на поршне наноинжектора с помощью уплотнительного кольца и прокладки для точного и контролируемого впрыска, обеспечивая минимальный ущерб для мух.

Высвободите минеральное масло, оставив небольшое количество в игле в качестве барьера между бактериальным раствором и инжектором. Нагрузите иглу бактериальной суспензией.

Расположите обезболенную Drosophila melanogaster вентролатеральной стороной вверх.

Введите иглу в переднюю часть брюшной полости мухи, прокалывая кутикулу и эпителиальный слой. Введите бактериальную суспензию в гемоцел — полость тела, содержащую гемолимфу — богатую питательными веществами циркуляционную жидкость.

В гемоцеле иммунные клетки, называемые гемоцитами, циркулируют вместе с жировым телом, специализированной тканью, оснащенной рецепторами распознавания образов.

Дайте введенным мухам восстановиться во флаконе, содержащем среду. Введенные бактерии используют питательные вещества из гемолимфы и размножаются, увеличивая бактериальную нагрузку, и создают системную инфекцию.

Рецепторы жировых клеток организма взаимодействуют с бактериальными антигенами, вызывая иммунный ответ на выработку антимикробных пептидов, что в конечном итоге приводит к уничтожению некоторых бактерий.

Циркулирующие гемоциты проявляют фагоцитарную активность, поглощая и разрушая несколько бактерий. Тем не менее, некоторые бактерии уклоняются от иммунного ответа хозяина и выживают внутри мух, создавая бактериальную инфекцию.

Подготовьте стеклянную иглу, потянув за капилляр боросиликатного стекла, и с помощью щипцов отломайте кончик иглы, чтобы создать отверстие диаметром 50 микрометров. Затем поместите уплотнительное уплотнительное кольцо и белую распорку большой ямочкой наружу на металлический поршень инжектора. Наполните стеклянную иглу минеральным маслом с помощью шприца с иглой 30-го калибра.

Затем проденьте заполненную стеклянную иглу через цангу и поместите большее уплотнительное кольцо вокруг ее основания, на расстоянии 1 миллиметра от тупого конца иглы. Наденьте иглу на металлический поршень и аккуратно закрутите цангу до упора.

Удалите минеральное масло из инжектора, оставив небольшой объем масла в игле, который будет действовать как барьер между инжектором и бактериальной суспензией. Убедитесь, что в минеральном масле, бактериальной суспензии или между двумя жидкостями нет пузырьков воздуха. Затем установите инжектор на нужный объем для впрыска. Осторожно введите кончик капиллярной иглы в пробирку со стерильным ПБС, и нажмите кнопку заполнения на инжекторе, чтобы заполнить иглу инжектора.

Чтобы добиться контроля над ранами, обезболиваемым мухам вводят стерильный PBS в переднюю часть брюшной полости на вентролатеральной поверхности. Поместите введенных мух в свежие флаконы с новой средой и положите флаконы на бок, чтобы предотвратить прилипание мух к пище до того, как они оправятся от анестезии. Далее изгоните остатки стерильных сред из инъектора, и снова наполните ту же иглу бактериальной суспензией. Повторите процедуру и введите мухам бактериальную суспензию.