Метод септического укола для внедрения системной бактериальной инфекции у мух

Чтобы исследовать иммунный ответ дрозофилы против патогенных микробов, принимают суспензию жизнеспособных бактериальных патогенов. Опустите в суспензию стерильную иглу, набирая небольшое количество.

Поместите муху под наркозом под микроскоп для вскрытия. Зараженной иглой уколите муху у грудиноплевральной пластинки грудной клетки. При уколе в гемолимфу заводятся бактерии — циркуляционная жидкость в полости тела.

Поместите зараженных мух во флакон с кормом для мух и храните их в течение достаточного периода времени.

Бактерии используют гемолимфу в качестве богатого источника питательных веществ и размножаются, что приводит к системной инфекции. Гемолимфа содержит гемоциты, циркулирующие иммунные эффекторные клетки.

Гемолимфа также связана с жировым телом, специализированной тканью для хранения энергии. Рецепторы распознавания образов на жировых клетках тела взаимодействуют с бактериями. Это взаимодействие побуждает клетки секретировать антимикробные пептиды, опосредуя уничтожение бактерий.

Циркулирующие гемоциты взаимодействуют с бактериями через фагоцитарные рецепторы, вызывая их поглощение фагосомами и приводя к бактериальной деградации.

Подмножество патогенов уклоняется от иммунного ответа хозяина, что приводит к гибели мух.

Отслеживайте смертность мух и проводите последующие анализы для оценки иммунного ответа против патогена.

Чтобы подготовить заражающую ручку, расплавьте конец 200-микролитрового наконечника микропипетки и вставьте в расплавленный пластик 0,15-миллиметровую булавку с изображением насекомых. Дайте пластику застыть, чтобы штифт удерживался на месте с помощью штифта длиной 0,5 сантиметра, выступающего из пластика.

Обезболите мух углекислым газом, а также уколите мух иглой в область грудинной плевральной пластинки грудной клетки, избегая мест прикрепления крыльев и ног. Удалите мушек с мельчайшего булавки с помощью мягких щипцов. Обязательно окуните булавку в бактериальную суспензию между уколами каждой мухи.

Поместите уколовшихся мух в свежую напильник с новой средой для мух, положив флакон на бок, пока все мухи не оправятся от анестезии.