Энциклопедия экспериментов JoVE
Иммунология
0 просмотров • 3:40 мин. • July 8th, 2025
Начните со взрослых мух Drosophila melanogaster, которым вводят кишечную палочку. В желаемые моменты времени после инъекции перенесите обезболенных мух в отдельные микроцентрифужные пробирки на льду, снижая их метаболическую активность.
Добавьте буфер и гомогенизируйте мух, разрушая ткани, высвобождая кишечную палочку и эндогенную микробиоту кишечника.
Переведите каждый гомогенат мухи, содержащий E. coli, в лунки с несколькими лунками. Оставшиеся лунки заполните буфером. Проводят серийное разведение гомогената, содержащего E. coli.
Разбавленную гомогенатную суспензию выложите из каждой лунки в виде отдельных пятен на питательную агаровую пластину, начиная с наименьшего разбавления. Дайте пятнам впитаться в агар. Инкубируйте пластину на ночь, чтобы обеспечить размножение кишечной палочки, образуя видимые колонии. Продолжительность инкубации имеет решающее значение для предотвращения формирования эндогенных колоний кишечной микробиоты мухи.
Подсчитайте колонии кишечной палочки для каждой мухи из разведений с подсчитываемыми неперекрывающимися колониями. Рассчитайте колониеобразующую единицу — жизнеспособную бактериальную нагрузку — в исходном гомогенате в разные моменты времени после
Просмотрите полный транскрипт и получите доступ к тысячам научных видео